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详细信息

新品推荐:植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒

 植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒产品说明书

 

主要用途

 

植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂是一种旨在通过长波长的荧光染料特异性地聚集在线粒体,并呈现红色,用于分析和观察线粒体活性与形态以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于新鲜植物组织(例如根尖等)线粒体的形态观察、活性探测和定位标记。产品严格无菌,即到即用,活体检测,分辨率高,操作简捷,性能稳定,滞留持久。

 

技术背景

 

线粒体是细胞中重要的细胞器,其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中, 在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。线粒体荧光探针MitoTracker RED,是一种含有硫醇Thiol)氯甲基基团的荧光染料,自由通过细胞膜,选择性地聚集在线粒体。它可以对活细胞进行直接染色,在580nm波长可以清晰看到被染成红色的线状或颗粒小体的线粒体。并可以分析线粒体膜电位,以检测线粒体活性。

 

产品内容

 

清理液(Reagent A            100毫升

固着液(Reagent B             50毫升

离析液(Reagent C             20毫升

预备液(Reagent D              1毫升

染色液(Reagent E             10微升

产品说明书     1

 

保存方式

 

保存染色液(Reagent E在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里;固着液(Reagent B)和离析液(Reagent C)具有腐蚀性,注意操作安全;有效保证6

 

用户自备

 

1.5毫升离心管:用于染色液配制的容器

载玻片:用于组织置放染色

解剖针:用于植物组织解剖

培养箱:用于染色孵育

(共聚焦)荧光显微镜:用于细胞荧光分析

 

实验步骤

 

实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent E置入冰槽里融化,然后分别移出38微升预备液(Reagent D2微升染色液(Reagent E到新的1.5毫升离心管,标记为染色工作液,并放在暗室里备用。然后进行下列操作。

 

方法一:活体染色

 

1. 加上100微升清理液(Reagent A在载玻片上

2. 切取新鲜植物根尖,放进载玻片上的清理液(Reagent A

3. 解剖针小心压碎根尖

4. 小心移去清理液(Reagent A

5. 小心加上1毫升清理液(Reagent A根尖上

6. 小心加入10微升含有预备液(Reagent D染色液(Reagent E染色工作液

7. 放进37℃培养箱里孵育20分钟

8. 取出载玻片,移去染色液

9. 小心加上1毫升清理液(Reagent A

10. 小心移去清理液(Reagent A

11. 盖上盖玻片,用拇指小心且垂直加压

12. 即刻在(共聚焦)荧光显微镜下进行观察:激发波长579nm,散发波长599nm(线粒体呈现红色)

 

方法二:固定染色

 

1. 加上100微升清理液(Reagent A在载玻片上

2. 切取新鲜植物根尖,放进载玻片上的清理液(Reagent A

3. 解剖针小心压碎根尖

4. 小心移去清理液(Reagent A

5. 小心加上2毫升固着液(Reagent B

6. 室温下,孵育3小时,避免干化

7. 小心移去固着液(Reagent B

8. 小心加上1毫升清理液(Reagent A

9. 小心移去清理液(Reagent A

10. 小心加上1毫升离析液(Reagent C

11. 室温下孵育5分钟

12. 小心移去离析液(Reagent C

13. 小心加上1毫升清理液(Reagent A

14. 小心移去清理液(Reagent A

15. 小心加上1毫升清理液(Reagent A根尖上

16. 小心加入10微升含有预备液(Reagent D染色液(Reagent E染色工作液

17. 放进37℃培养箱里孵育20分钟

18. 取出载玻片,移去染色液

19. 小心加上1毫升清理液(Reagent A

20. 小心移去清理液(Reagent A

21. 盖上盖玻片,用拇指小心且垂直加压

22. 即刻在(共聚焦)荧光显微镜下进行观察:激发波长579nm,散发波长599nm(线粒体呈现红色)

 

注意事项

 

1. 本产品为20次操作

2. 操作时,须戴手套

3. 固着液(Reagent B离析液(Reagent C具有腐蚀性,注意操作安全

4. 孵育时,必须避免光照

5. 建议染色完成后,即刻进行荧光检测分析

6. 剩余的染色工作液可放进-20℃储存备用

7. 本产品适合活体染色和固定染色,染色剂不易洗掉,染色持久

8. 根据不同组织类型,调整染色工作液的使用剂量(110011000容量比),避免过度染色

9. 本公司提供系列线粒体分析试剂产品

 

质量标准

 

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定荧光清晰

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